武汉大学研究发现，cGAS-STING介导的天然免疫通路在电转双链DNA（dsDNA）诱导原代T细胞死亡中起着关键作用，揭示电转缓冲液的渗透压能直接调节cGAS-DNA结合亲和力，进而影响cGAS-STING激活。利用等渗电转缓冲液可极大降低该通路的激活和细胞死亡，制备的CAR-T细胞数比商业电转多20倍；相较于慢病毒构建的CAR-T, 编辑效率和表达量均提高3倍，杀肿瘤活力更高。
该研究开发了一种准确、高效且安全的递送方法用于构建更有效的CAR-T细胞，为调控cGAS-STING通路的激活打开了新思路，为非病毒递送构建CAR-T的临床转化研究奠定了基础。
研究首先探究了不同类型DNA对T细胞内cGAS-STING激活的影响，包括质粒、线性长双链DNA、线性长单链DNA，短双链DNA和短单链DNA。结果显示，只有当电转质粒和线性长双链DNA时，T细胞活力明显降低，cGAS-STING通路显著激活。当敲除cGAS或STING时，电转dsDNA的细胞活力显著提高，证明电转长双链DNA诱导原代T细胞死亡主要是由cGAS-STING通路激活导致。
由于cGAS-STING通路具有重要生物学功能，因此研究尝试瞬时抑制cGAS-STING通路，以实现降低电转递送DNA产生的细胞毒性。在试验了小分子抑制剂和siRNA后，发现STING小分子抑制剂H151无法抑制cGAS-STING激活，而使用siRNA敲低STING需要两次电转递送，对T细胞产生极大刺激，导致大量细胞死亡。通过高通量筛选电转缓冲液和电转参数后，研究发现优化电转缓冲液能显著降低cGAS-STING的激活程度，且能够有效提高T细胞活力和电转递送效率。
进一步机制研究发现，电转缓冲液的渗透压能够调控细胞内cGAS与DNA结合亲和力，进而影响第二信使2'3'-cGAMP产生，最终调节cGAS-STING通路的激活。当电转缓冲液的渗透压为等渗时，cGAS-DNA结合亲和力降低，仅产生少量2'3'-cGAMP，极大降低了cGAS-STING激活。
最后，研究利用等渗电转缓冲液构建CAR-T细胞，产生的CAR-T阳性细胞绝对数比使用商业电转缓冲液多达20倍。与传统慢病毒递送相比，利用等渗电转缓冲液递送CRISPR构建CAR-T的效率更高，且具有比慢病毒递送构建的CAR-T细胞更高的抗肿瘤活性。（信息来源：生物世界）
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